Acta Scientiarum Polonorum

Czasopismo naukowe założone w 2001 roku przez polskie uczelnie rolnicze

| Informacje | Recenzenci | Rada Programowa | Rady naukowe | Adresy redakcji | Serie | Wymogi edytorskie | Wzorcowy artykuł | Warunki publikacji | Procedura recenzowania | Prenumerata | Streszczenia | Szukaj | Statystyki |
Hortorum Cultus
(Ogrodnictwo) 13 (4) 2014
Tytuł
Zakładanie hodowli kalusowej jako narzędzie w inżynierii metabolicznej Rhodiola rosea L.
Autor
Iman Mirmazloum, István Forgács, Anikó Zok, Andrzej Pedryc, Zsuzsanna György
Słowa kluczowe
różeniec górski, transformacja, transgeniczna hodowla kalusa, A. tumefaciens, nptII, GUS 10/17
Streszczenie
Szczep Agrobacterium tumefaciens EHA101 (pTd33) przenoszący gen reporterowy uidA (GUS) został użyty w modelowych doświadczeniach nad transformacją kalusa różeńca górskiego. T-DNA z plazmidy wektora binarnego pTd33 mieści w sobie gen nptII przekazujący odorność kanamycynie, natomiast gen reporterowy uidA koduje enzym β-glukuronidazy. Nasiona korzenia różeńca gorskiego wysterylizowano i poddano kiełkowaniu na połowie zestawu pożywki MS. Spośród nich 70% wykiełkowało bez żadnego wcześniejszego zabiegu. Kalusy otrzymano z segmentów liści sadzonek wyrosłych in vitro. Kalusy wyhodowano na stałej pożywce MS z dodatkiem 1 mg l-1 NAA oraz 0,5 mg l-1 BAP. Uzyskano różne typy kalusa, z których typ zielony i zwarty został wybrany do doświadczeń dotyczących transformacji. Po wspólnej hodowli z agrobakteriami kalusy były przeniesione to tej samej pożywki uzupełnionej 20 mg l-1 kanamycyny, 200 mg l-1 karbenicyliny oraz 300 mg l-1 klaforanu z przeciwutleniaczami (Polyclar i DTE) do selekcji. Zastosowano test GUS przy użyciu bufora trytronowego do monitorowania kalusów. Wyodrębniono 20 indywidualnych próbek DNA i poddano je analizie PCR, która wykazała stabilną transformację we wszystkich próbkach poprzez amplifikowanie fragmentu genu nptII. Metoda przedstawiona tutaj może być narzędziem insercji i ekspresji kodowania genów do hipotetycznych enzymów, które mają brać udział w biosyntezie ważnych z punku widzenia farmaceutycznego molekuł różeńca górskiego, co ułatwi zastosowanie hodowli kalusów różeńca górskiego w różnych systemach bioreaktorów w produkcji farmaceutycznej.
Strony
95-106
Cytowanie
Mirmazloum, I., Forgács, I., Zok, A., Pedryc, A., György, <. (2014). Zakładanie hodowli kalusowej jako narzędzie w inżynierii metabolicznej Rhodiola rosea L.. Acta Sci. Pol. Hortorum Cultus, 13(4), 95-106.
Pełny tekst