W pracy badano efektywność izolacji liniowych plazmidów dsDNA z komórek drożdży D. hansenii po zastosowaniu enzymatycznych metod protoplastyzacji, mechanicznych technik dezintegracji oraz chemicznej lizy komórek. Wykorzystane w procesie protoplastyzacji lytikaza z Arthrobacter luteus oraz mieszanina enzymów litycznych z Trichoderma harzianum umożliwiły efektywną izolację liniowych plazmidów. Lytikaza okazała się enzymem najszybciej lizującym ścianę komórkową, podczas gdy zaletą enzymów T. harzianum była czystość otrzymanego preparatu DNA. β-glukuronidaza nie powodowała wydajnego trawienia ściany komórkowej, przez co uznana została za nieodpowiednią do tego procesu. Wszystkie metody mechaniczne (rozcieranie kulkami szklanymi, mikrotłoczkami, mrożenie w ciekłym azocie, rozbijanie w Mikro-Dismembratorze) okazały się w pełni użyteczne do izolacji plazmidów w przeciwieństwie do metod chemicznych. Standardowo stosowana do izolacji plazmidów kolistych metoda lizy alkalicznej z SDS powodowała utratę plazmidów, natomiast CelLytic Y Cell Lysis Reagent prowadził do otrzymania wysoce zanieczyszczonych próbek.

5-16